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同源重组引物设计方法
同源重组的基因克隆方法， 相比双酶切载体构建方法，该方法的构建过程有些不同。首先，靶基因片段扩增引物有别于常规引物设计；萊垍頭條
其次，载体切割过程中只需要进行单酶切；萊垍頭條
第三，载体和目的基因片段的连接是基于同源重组而不是粘性末端互补。萊垍頭條
如何设计引物，给出了一个基因的片段？
如果是扩增已知序列目的全长基因，肯定是要在基因序列外部设计引物，当然接下来还有克隆表达等操作，最好在引物设计时考虑增加酶切位点以及添加序列标签等。萊垍頭條
如果是扩增未知序列基因，一般要根据序列比对找到保守序列，设计兼并引物，扩增产物一般是目的基因的部分序列，还要通过3"、5‘race以及染色体步移等操作得到全长序列。頭條萊垍
怎么设计扩全长的引物？
1 确定你的siRNA设计的位点是否特异萊垍頭條
2 你研究的基因是否有多个剪切体萊垍頭條
3 你的qPCR的引物是否设计在全长蛋白的那个剪切体上條萊垍頭
如果你的siRNA设计的位点在isoformA上，但是检测的蛋白是isoformB表达出来的，那么你的qPCR的结果可能和蛋白的表达变化不一致。條萊垍頭
pcr反应反应引物设计原则是什么？
PCR引物设计原则PCR是目前研究DNA、RNA等核酸的非常有效和最主要的方法之一。它的原则主要是在模板cDNA的传统区域内设计方案、引物长短一般在15~30碱基中间、引物GC成分在40%~60%中间，Tm 值最好是贴近72℃、引物3′端要绕开密码子的第3位、引物3′端不可以挑选A，最好是挑选T等等。頭條萊垍
首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配) ，再次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。垍頭條萊
pcr引物序列如何确定？
1. 引物应在序列的保守区域设计并具有特异性。引物序列应位于基因组DNA的高度保守区，且与非扩增区无同源序列。这样可以减少引物与基因组的非特异结合，提高反应的特异性;垍頭條萊
2. 引物的长度一般为15-30 bp。常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA聚合酶进行反应;條萊垍頭
3. 引物不应形成二级结构。引物二聚体及发夹结构的能值过高(超过4.5kcal/mol)易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行;條萊垍頭
4. 引物序列的GC含量一般为40-60%。过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大;頭條萊垍
5. 引物所对应模板位置序列的Tm值在72℃左右可使复性条件佳。Tm值的计算有多种方法，如按公式Tm=4(G+C)+2(A+T);萊垍頭條
6. 引物5'端序列对PCR影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物。可根据下一步实验中要插入PCR产物的载体的相应序列而确定。萊垍頭條
7. 引物3’端不可修饰。引物3'端的末位碱基对Taq酶的DNA合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增效率，末位碱基为A的错配效率明显高于其他3个碱基，因此应当避免在引物的3'端使用碱基A。萊垍頭條
8. 引物序列自身或者引物之间不能在出现3个以上的连续碱基，如GGG或CCC，也会使错误引发机率增加;萊垍頭條
9. G值是指DNA双链形成所需的自由能，该值反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性。应当选用3'端G值较低(绝对值不超过9)，而5’端和中间G值相对较高的引物。引物的3’端的G值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应;萊垍頭條
诺唯赞上如何设计引物？
引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与目的基因一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与目的基因另一端的另一条DNA模板链互补。在PCR（聚合酶链式反应）技术中，已知一段目的基因的核苷酸序列，根据这一序列合成引物，利用PCR扩增技术，目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在耐高温DNA聚合酶作用下进行延伸，如此重复循环，延伸后得到的产物同样可以和引物结合。頭條萊垍
引物有什么特点？
引物，是指在核苷酸聚合作用起始时， *** 合成的一种具有特定核苷酸序列的大分子，与反应物以氢键形式连接，这样的分子称为引物。引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可由其3端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。