本文目录
pcr仪使用时，在设定反应程序时，一共分了多少个步骤？
反应体系的配制以25 ul为例：萊垍頭條
反应程序的设定以Bio-Rad CFX Real Time PCR仪为例：垍頭條萊
基因表达量的检测-扩增曲线的生成，萊垍頭條
95℃ 3min萊垍頭條
95℃ 10s萊垍頭條
60℃ 30s （此步骤末收集信号） 40 cycles。垍頭條萊
引物特异性检测-熔解曲线的生成，條萊垍頭
95℃ 10s萊垍頭條
65℃ -95℃， 每半℃升一次温度，持续5s（此步骤末收集信号）。頭條萊垍
PCR实验室的注意事项有什么？
1、建立样品准备区條萊垍頭
这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施：⑴PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。⑶用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。⑷DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。⑸大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。⑺任何时候都应该穿实验服和带手套，手套要经常更换，尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间，经常清洗。頭條萊垍
2、样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。萊垍頭條
3、建立前PCR区。萊垍頭條
该去专门用于准备各种反应，这个区域必须保持干净，而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备，特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。垍頭條萊
4、PCR实验室试剂的操作。條萊垍頭
⑴所用的所有溶液都应该没有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。⑵所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的－新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压灭菌。⑶在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。⑷所用试剂都应该以大体积配制，实验一下看试剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。⑸所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。⑹新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。⑺样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。頭條萊垍
5、在前PCR区建立PCR混合物。頭條萊垍
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃，在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。⑵如果你的实验室使用多套引物，以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济，可以考虑分装保存够一天的PCR成分。⑶作为一个规则，应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且，你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。⑷阴性样品要与每组样品同时做，以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染，阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。⑸当做阳性对照时，有两个理由决定了应该使用最少数量的核酸。⑹由于必须有对照反应，对照模板的特点应该予以考虑。萊垍頭條
6、控制污染的方法。萊垍頭條
已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用UNG，这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线，这种方法不能完全消除污染问题，但可以将污染降低几个数量级。頭條萊垍
7、后PCR区PCR完成以后，需要分析样品并解释数据，应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的，决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动 萊垍頭條
PCR实验室生物安全柜正确操作方法是？
生物安全柜正确使用方法：萊垍頭條
生物安全柜应定期进行消毒、清洗。在进行消毒、清洗操作时，操作者应穿前面封闭的防护衣，戴双层手套（内层为外科乳胶手套，外层为厚胶皮手套），戴护目镜、口罩。先用洗涤剂从上至下，从污染小到污染大的区域逐步清洗，再用去离子水或蒸馏水漂洗干净，漂洗时纱布应经常更换。污染严重的区域（排污槽）应至少用洗涤剂清洗两遍，收集洗涤、漂洗用水的收集管与排污管的连接处用纱布包裹严实，防止污物溅出及含有悬浮粒子的气体溢出，洗涤剂瓶及漂洗容器一般在操作中污染，所以应始终放在生物安全柜中。清洗之后，所有瓶子、保护性装置（防护衣、手套、眼罩、口罩）均应当作污染物丢到密封的废物袋中医|学教育网搜集整理。萊垍頭條
生物安全柜应24小时持续开风机。危险药物的悬浮颗粒和喷溅物通常沉积在工作区中很难吸入高效滤器中，并且生物安全柜的工作区通常为负压，一旦关掉风机，这些危险物便会污染环境。关掉风机前，必须彻底清洗生物安全柜，然后将其入口及高效滤器的排气口用塑料覆盖后用胶带封住。萊垍頭條
PCR仪如何设置？
1、按 PCR 仪正面左下角电源开关，启动 PCR 仪。萊垍頭條
2、放 PCR 离心管，先把顶盖向上扳，再往前推，露出放样孔，PCR 管萊垍頭條
放入前应加好反应体系各组分，再放入 PCR 离心管。頭條萊垍
3、反向重复第二步骤将顶盖板向后拉，盖好顶盖。頭條萊垍
4、按 F2“Create”新建一个扩增的 PCR 程序。萊垍頭條
5、按控制台面右方上下左右方向键，可随意移动编辑位置，输入需要萊垍頭條
的温度、时间、循环数等。頭條萊垍
6、据 PCR 离心管中加入的反应体积总量，在“Reaction volume”后输入萊垍頭條
相应数值，有 Std“1～100ul”和 9600“1~50ul”两档可供选择。萊垍頭條
7、按 F1“Start”启动條萊垍頭
8、按“INFO”对应键查看 PCR 结束键。條萊垍頭
9、扩增完成后按台面左方“Stop”键退出。垍頭條萊
10、按“Hist”，可查看上次扩增的历史记录。11、完全退出后，按台面左下方电源开关，拔出插销，切断电源。萊垍頭條
96孔pcr板手工使用方法？
1.1. 仪器操作步骤 萊垍頭條
1.1.1. 插上电源线（先连接PCR仪，再插入电源插座），打开主机及模块背面的开关，屏幕出现self testing进度条，仪器开始自检，等待仪器完成自检。可进行下一步操作。 萊垍頭條
1.1.2. 用功能键选择NEW或RUN，创建一个新程序或调出已有程序。 1.1.3. 抓住热盖前端的凹槽，先前下压，然后往上提起热盖。 1.1.4. 放入已经上完样并密封的PCR管或板。 頭條萊垍
1.1.5. 盖上热盖，顺时针旋紧热盖上的旋钮，当热盖压力适合时，会发出齿轮刮擦的声音，此时停止旋紧。 萊垍頭條
1.1.6. 可通过STATUS或TIME 两个功能键查看程序运行状态。 1.1.7. 按CANCEL键可取消正在运行的程序，按PAUSE键可暂停运行。 1.1.8. 程序运行结束，选择MAIN可回到主菜单界面。 垍頭條萊
1.1.9. 程序运行结束后，先逆时针旋松热盖，然后再按3中指示开盖取出样品。 萊垍頭條